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雙向擴散試驗

　　雙向擴散試驗：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U散，在最恰當?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對比關(guān)系，可對抗原或抗體作出定性分析。雙向擴散試驗也分為試管法和平板法。

　　1、試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴散，在抗原、抗體濃度最適時形成沉淀線。

　　2、平板法：

　　是在瓊脂板上相距3～5mm打一對孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對含量。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。

　�、诳乖⒖贵w相對分子量的分析;抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴散，其速度受分子量影響。分子量小者，擴散快，反之較慢。由于慢者擴散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。

　　③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況;

　　④抗體效價的滴定�？贵w效價是抗原、抗體經(jīng)過自由擴散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價

單向擴散試驗

　　單向擴散試驗：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。

　　1、試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴散，在抗原抗體比例恰當位置形成沉淀環(huán)。

　　2、平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測定環(huán)的直徑或面積計算標本中待測抗原的濃度。有兩種計算方法：l)Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時間擴散(>48h)的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.(其中c為抗原濃度d為沉淀環(huán)直徑k為常數(shù))

　　3、單向擴散試驗檢測時的注意點：

　　(1)抗血清必須特異性強、效價高、親和力強，在良好條件下保存。

　　(2)每次測定都必須作標準曲線。

　　(3)每次測定時必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

　　(4)注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。

　　(5)應(yīng)用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時，測定值偏低;用多克隆抗體測量單克隆病時，測定值偏高。

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