。ㄒ唬囟
各種細(xì)菌都需在最適生長溫度的范圍內(nèi)生長。當(dāng)外界溫度明顯高于最適生長溫度,細(xì)菌被殺死;如果在低于細(xì)菌的最低生長溫度時,細(xì)菌代謝活動受抑制,則出現(xiàn)抑菌作用。
1.高溫:細(xì)菌蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞壁和細(xì)胞膜及酶類因熱力作用發(fā)生變性或凝固,活性消失,代謝發(fā)生障礙導(dǎo)致細(xì)菌死亡。大多數(shù)無芽胞細(xì)菌55℃~60℃加熱30~60min即被殺死;加熱100℃立即死亡,有芽胞的破傷風(fēng)芽胞梭菌需煮沸3h才被殺死。熱力滅菌分濕熱和干熱兩種。在同一溫度下,前者的效力大于后者醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)。
。1)濕熱:常用的方法有
1)巴氏消毒法:方法有兩種:一是61.1℃~62.8℃30min;另一是71.7℃l5~30s,目前主要用于牛乳消毒。
2)煮沸法:煮沸100℃(1個大氣壓狀態(tài)下)。5min中可殺死細(xì)菌繁殖體,如于水中加入2%碳酸鈉,則可提高其沸點至105℃,既殺死芽胞,又防止金屬器皿生銹。
3)流通蒸氣滅菌法:常用阿諾(Arnold)流通蒸氣滅菌器或蒸籠。利用一個大氣壓下100℃水蒸氣進行消毒。經(jīng)10~30min細(xì)菌繁殖體被殺死,但對芽胞的作用不大醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)。
4)間歇滅菌法:采用間歇加熱方式達到滅菌目的。方法是將待滅菌物品置于Arnold滅菌器內(nèi),經(jīng)l00℃加熱15~30min,每日一次,連續(xù)3次。每次滅菌后,取出再置37℃孵箱過夜,使殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再通過流通蒸氣加熱使之被殺死。這樣可達到殺死芽胞又使不耐100℃的物質(zhì)保存下來。
5)加壓蒸汽滅菌法:利用密閉的耐高壓的高壓蒸汽滅菌器,在蒸汽不外溢的條件下,使鍋內(nèi)壓力增高,蒸汽的溫度也隨之增高,大大加強其殺菌效力。通常在103.4kPa的壓力下達121.3℃,維持15~20min可殺滅所有細(xì)菌芽胞和繁殖體。本法適用于耐高溫、耐濕物品的滅菌,如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。
(2)干熱
1)燒灼:是常用的干熱滅菌法。微生物實驗室使用的接種環(huán)、接種針、瓶口和試管口常在火焰上燒灼滅菌。
2)干烤:在密閉干烤箱內(nèi)加溫至160℃~170℃維持2h是對一般玻璃器皿、注射器、瓷器的滅菌方法,適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)。
2.低溫:一般細(xì)菌耐低溫,在低溫條件下,細(xì)菌代謝活動降低不再繁殖,能較長時間維持生命,故常用于保存菌種。為避免解凍時對細(xì)菌的損傷,可在低溫狀態(tài)下真空抽干,去盡水分,此法稱冷凍真空干燥法,可保存細(xì)菌數(shù)年至數(shù)十年,是目前保存菌種的最好方法。
。ǘ┕饩和射線
隨光線和射線的波長、強度、作用距離、持續(xù)時間而影響它們對細(xì)菌的作用。
1.日光和紫外線:發(fā)揮殺菌作用的日光主要是紫外線,波長265~266nm時殺菌作用最強。這是由于紫外線使DNA分子形成胸腺嘧啶雙聚體,干擾DNA正常復(fù)制,導(dǎo)致細(xì)菌死亡。此外紫外線可使分子氧變成臭氧,后者具有殺菌能力。殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼角膜等均有損傷作用,使用時應(yīng)注意防護。
人工紫外線用低壓水銀蒸氣燈產(chǎn)生,照射的能量以單位時間內(nèi)每平方厘米的微瓦數(shù)(μw)計算。一支15W的紫外燈在1m內(nèi)傳遞38μw.s/cm2射線。無芽胞菌一般的致死量為1800~6500μw.s/cm2,殺死芽胞則需該劑量的10倍。
2.電離輻射:微生物體中的水受電離照射后產(chǎn)生的自由基及自由基離子破壞微生物核酸、酶和蛋白質(zhì)致微生物死亡,適用于不耐熱物品的滅菌。如X線、γ射線、高速電子等。
。ㄈ┏暸c超聲波
不被人耳感受的高于20千周/秒的聲波稱超聲波。殺菌機制是超聲波通過液體時發(fā)生的空腔化作用破壞了原生質(zhì)的膠體狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)菌死亡。一般用于細(xì)胞的粉碎以提取細(xì)胞組分和抗原制備醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)。
。ㄋ模V過除菌
濾過是以物理阻留方法將液體或空氣中的微生物除去。所用的器具為濾器。濾器中的微孔只允許液體或氣體中小于濾孔孔徑的物質(zhì)通過。濾器中的復(fù)層網(wǎng)狀微孔結(jié)構(gòu)通過毛細(xì)管阻留、篩孔阻留和靜電吸附綜合作用達到除菌效能。
濾器的種類很多,目前常用的有薄膜濾器。用于除菌的濾膜孔徑為0.22μm.另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱Seitz濾器(蔡氏濾器),按其濾孔大小分成三種:K型濾孔最大,澄清用;EK-S濾孔最小,可阻止大病毒通過;EK濾孔居中,用以去除一般細(xì)菌。全由玻璃制成的玻璃濾器分成G1~G6六種。G5、G6兩型能阻止細(xì)菌通過。
(五)干燥
許多細(xì)菌的繁殖體在空氣中干燥時可以死亡。干燥引起細(xì)菌脫水、蛋白質(zhì)變性和鹽類濃縮,因而妨礙細(xì)菌的代謝、生長、繁殖而引起細(xì)菌死亡。各種細(xì)菌對干燥的抵抗力不同,肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌較;鏈球菌、葡萄球菌與結(jié)核桿菌等較大;芽孢抵抗力最大。含于飛沫或痰液中的細(xì)菌,因受有機物的保護,可以抵抗干燥,此與呼吸道感染的傳布有關(guān)。食物經(jīng)曬干、烘干、風(fēng)干等干燥后,水分減少,不適于細(xì)菌等繁殖,因而可延長食物的保存時間,起到防腐作用。
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