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熒光抗體技術(shù)
(1)熒光抗體的制備和鑒定：
�、倏贵w熒光素標(biāo)記：用于標(biāo)記抗體，要求是高特異性和高親和力的。作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求：
1)應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。
2)熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。
3)熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。
4)與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。
5)標(biāo)記方法簡單、安全無毒。
6)與蛋白質(zhì)的結(jié)合穩(wěn)定，易于保存。常用的標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。
②熒光抗體的鑒定：包括效價(jià)及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率。抗體效價(jià)可以用瓊脂雙擴(kuò)散法進(jìn)行滴定，效價(jià)大于1：16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率(F/P)來計(jì)算。F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1.5為宜，用于活細(xì)胞染色的以F/P=2.4為宜。
(2)免疫熒光顯微技術(shù)：是使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行反應(yīng)，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。
�、贅�(biāo)本的制作：主要靠觀察切片標(biāo)本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。
②熒光抗體染色：滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體進(jìn)行染色。
�、蹮晒怙@微鏡檢查：最好在染色當(dāng)天即作鏡檢，以防熒光消退，影響結(jié)果。
④實(shí)驗(yàn)的類型：包括直接法、間接法、補(bǔ)體結(jié)合法和雙標(biāo)記法。
免疫效應(yīng)分子
在免疫細(xì)胞針對抗原(特別是細(xì)胞性抗原)行使免疫效應(yīng)功能時(shí)，細(xì)胞因子是其中重要效應(yīng)分子之一。例如TNFα和TNFβ可直接造成腫瘤細(xì)胞的凋零(apoptosis)，使瘤細(xì)胞DNA斷裂，細(xì)胞萎縮死亡;干擾素α、β、γ可干擾各種病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，從而防止病毒擴(kuò)散;LIF可直接作用于某些髓性白血病細(xì)胞，使其分化為單核細(xì)胞，喪失惡性增殖特性。另有一些細(xì)胞因子通過激活效應(yīng)細(xì)胞而發(fā)揮其功能，如IL-2和IL-12刺激NK細(xì)胞與TC細(xì)胞的殺腫瘤細(xì)胞活性。與抗體和補(bǔ)體等其它免疫效應(yīng)分子相比，細(xì)胞因子的免疫效應(yīng)功能，因而在抗腫瘤、抗細(xì)胞內(nèi)寄生感染、移植排斥等功能中起重要作用。
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