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　　細(xì)菌的接種與分離技術(shù)

　　(一)平板劃線分離法

　　在被檢標(biāo)本中，常混雜有多種細(xì)菌，平板劃線分離法可使這多種細(xì)菌在培養(yǎng)基表面分散生長(zhǎng)，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落的形態(tài)及特征，挑選單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。常用的平板劃線分離法有以下兩種：

　　1.連續(xù)劃線分離法　此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板1/5處密集涂布，然后來回作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。

　　2.分區(qū)劃線分離法　本法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)(第一區(qū))內(nèi)，約占平板1/5面積，再在二、三、……區(qū)依次連續(xù)劃線。每劃完一個(gè)區(qū)，均將接種環(huán)滅菌一次。每一區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。

　　(二)斜面接種法

　　該法主要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。用滅菌的接種環(huán)取單個(gè)菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端。

　　(三)液體接種法

　　多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。用滅菌接種環(huán)取菌少許，在試管內(nèi)壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混合于培養(yǎng)液中。

　　(四)穿刺接種法

　　此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種。用接種針取細(xì)菌少許，從半固體培養(yǎng)基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接觸管底，然后接種針沿原路退出。

　　(五)傾注平板法

　　測(cè)定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù)時(shí)常用此方法。將標(biāo)本經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取一定量加入已滅菌的平皿內(nèi)，傾入已溶化并冷卻至45℃左右的定量培養(yǎng)基，混勻，待凝固后倒置、培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基內(nèi)的菌落數(shù)和稀釋倍數(shù)，即可計(jì)算出標(biāo)本的細(xì)菌數(shù)。

　　(六)涂布接種法

　　常用于紙片法藥物敏感性測(cè)定，也可用于被檢標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。加定量的被檢菌液于瓊脂平板表面，然后用滅菌的L型玻璃棒反復(fù)涂布幾次，使被檢物均勻分布在瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片培養(yǎng)，或直接培養(yǎng)觀察結(jié)果。

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