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　　免疫電泳技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

　　(一)加快了沉淀反應(yīng)的速度;

　　(二)電場(chǎng)規(guī)定了抗原抗體的擴(kuò)散方向，使其集中，提高了靈敏度;

　　(三)可將某些蛋白組分根據(jù)其帶電荷的不同而將其分開(kāi)，再分別與抗體反應(yīng)。

　　對(duì)流免疫電泳

　　對(duì)流免疫電泳是免疫電泳技術(shù)中的一種，還包括免疫電泳、火箭電泳等方法。

　　在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動(dòng)慢，受電滲作用的影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時(shí)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動(dòng)快，雖然由于電滲作用泳動(dòng)速度減慢，但仍能向正極泳動(dòng)。如將抗原置陰極，抗體置陽(yáng)極，電泳時(shí)，兩種成分相對(duì)泳動(dòng)，一定時(shí)間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢?jiàn)的沉淀線。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動(dòng)，因而加速了反應(yīng)的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時(shí)，抗原抗體向四周自由擴(kuò)散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時(shí)間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測(cè)定。

　　火箭免疫電泳

　　火箭免疫電泳(rocket immunoelectrophoresis，RIEP)是將單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測(cè)技術(shù)。

　　電泳時(shí)，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動(dòng)，而在電場(chǎng)的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動(dòng)。當(dāng)抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時(shí)，形成一個(gè)形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時(shí)，以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動(dòng)后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長(zhǎng)度即可計(jì)算出待測(cè)抗原的含量;反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度固定時(shí)，便可測(cè)定待測(cè)抗體的含量(即反向火箭免疫電泳)。

　　免疫電泳法

　　免疫電泳法是指利用凝膠電泳與雙向免疫擴(kuò)散兩種技術(shù)結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法。在電場(chǎng)作用下標(biāo)本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶，然后沿電泳平行方向?qū)⒛z挖一溝槽，將抗體加入溝槽內(nèi)，使抗原與抗體相互擴(kuò)散而形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置及形狀，以分析標(biāo)本中所含組分的性質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)常用于抗原分析及免疫性疾病的診斷。此法在微量的基礎(chǔ)上具有分辨率高，靈敏度高，時(shí)間短，是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測(cè)定。

　　免疫固定電泳

　　免疫固定電泳是一種包括瓊脂凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個(gè)過(guò)程的操作。血清IFE可檢測(cè)IgG、IgM、IgA等及κ輕鏈、λ輕鏈。原理是將樣本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后其上覆蓋抗血清濾紙，濾紙分別含抗κ輕鏈、抗λ輕鏈，或抗各類(lèi)重鏈抗血清，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中的單克隆Ig結(jié)合，可形成免疫復(fù)合物沉淀，即固定，再通過(guò)漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而窄的著色區(qū)帶，即可判別單Ig的輕鏈和重鏈的類(lèi)別。血清樣本要求使用免疫項(xiàng)目藍(lán)色管采集靜脈血，避免溶血。

　　交叉免疫電泳

　　用瓊脂糖作支持物，先將抗原經(jīng)電泳展開(kāi)，然后在同一玻板上澆注含抗體的瓊脂糖凝膠，在后一個(gè)凝膠中進(jìn)行第二次電泳(與第一次電泳方向垂直)。這種方法實(shí)際上是在凝膠電泳后進(jìn)行免疫電擴(kuò)散。不同抗原形成互相獨(dú)立的峰狀免疫沉淀，至最適抗原/抗體比值處停止運(yùn)動(dòng)，沉淀峰的高度和面積與抗原量成比例關(guān)系。用此法可進(jìn)行各種抗原的定量測(cè)定。

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