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熒光色素概述:
許多物質都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有:
1.異硫氰酸熒光素:為黃色或橙黃色結晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 389.4,最大吸收光波長為490-495nm,最大發(fā)射光波長520-530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,結構式如下:有兩種同分異結構,其中異構體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質結合能力等方面都更好,在冷暗干燥處可保存多年,是應用最廣泛的熒光素。
其主要優(yōu)點是:①人眼對黃綠色較為敏感,②通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。
2.四乙基羅丹明:為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性質穩(wěn)定,可長期保存。結構式如下:最大吸收光波長為570nm,最大發(fā)射光波長為595~600nm,呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明:結構式如下:最大吸引光波長為 550nm,最大發(fā)射光波長為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標記或對比染色。其異硫氰基可與蛋白質結合,但熒光效率較低。
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