熒光色素概述:
許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有:
1.異硫氰酸熒光素:為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 389.4,最大吸收光波長為490-495nm,最大發(fā)射光波長520-530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,結(jié)構(gòu)式如下:有兩種同分異結(jié)構(gòu),其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好,在冷暗干燥處可保存多年,是應(yīng)用最廣泛的熒光素。
其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對黃綠色較為敏感,②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。
2.四乙基羅丹明:為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定,可長期保存。結(jié)構(gòu)式如下:最大吸收光波長為570nm,最大發(fā)射光波長為595~600nm,呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明:結(jié)構(gòu)式如下:最大吸引光波長為 550nm,最大發(fā)射光波長為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合,但熒光效率較低。
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