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尿液化學(xué)成分檢查項(xiàng)目之一
尿液蛋白為尿液化學(xué)成分檢查中最重要的項(xiàng)目之一。正常人的腎小球?yàn)V液中存在小分子量的蛋質(zhì)，在雙月刊牢牢曲小管時(shí)絕大部分又被重吸收，因此終尿中的蛋白質(zhì)含量很少，僅為30-130mg/24h.隨機(jī)一次尿中蛋白質(zhì)為0.80mg/L.尿蛋折定性試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)。
當(dāng)尿液中蛋白質(zhì)超過正常范圍時(shí)稱為蛋白尿，含量大于0.1g/L時(shí)定試驗(yàn)可陽(yáng)性。正常時(shí)分子量在7萬(wàn)以上的蛋白質(zhì)不能通過腎小球?yàn)V過膜，而分子量1-3萬(wàn)的低分子蛋白質(zhì)雖大多可通過濾過膜，但又為近曲小管重吸收，由于腎小管細(xì)胞分泌的蛋白如TammHorsfall蛋白(T-H蛋白)、SigA等以及下尿路分泌的粘液蛋白可進(jìn)入尿中。
尿蛋白質(zhì) 2/3來自血漿蛋白，其中白蛋白約占40%其余為小分子量的酶(溶菌酶等、)肽類、激素類先進(jìn)，如將正常人尿液濃縮后再經(jīng)免疫電泳，可按蛋白質(zhì)的分子量量大小分成以下3組：
①高分子量蛋白質(zhì)：分子量大于9萬(wàn)，含量極微，包括由腎髓袢升支極及遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞分泌的T-H糖蛋白及分泌型IGA等;
�、谥蟹肿恿康鞍踪|(zhì)：分子量4-9萬(wàn)，是以白蛋白為主的血漿蛋白，可占尿蛋月總數(shù)的1/2-2/3;③低分子量蛋白質(zhì)：分子量小于4萬(wàn)，絕大多數(shù)已在腎小管重吸收。因此尿中含量極少，如免疫球蛋白FC片段，游離輕鏈、α1微球蛋白、β2微球蛋白等。
熒光色素
許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：
1.異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為 389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490——495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)520——530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，結(jié)構(gòu)式如下：有兩種同分異結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好，在冷暗干燥處可保存多年，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是：①人眼對(duì)黃綠色較為敏感，②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。
2.四乙基羅丹明(rhodamine，RIB200)為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。結(jié)構(gòu)式如下：最大吸收光波長(zhǎng)為570nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為595～600nm，呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)結(jié)構(gòu)式如下：最大吸引光波長(zhǎng)為 550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧�。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。
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