2012臨床醫(yī)師診斷基礎(chǔ)輔導(dǎo)：免疫檢測(cè)樣本制備

　　流式細(xì)胞儀測(cè)定的標(biāo)本，不論是外周血細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞或組織來源細(xì)胞，首先要保證是單細(xì)胞懸液，對(duì)不同來源的細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液有不同的處理程序。

　　(一)外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備

　　血和骨髓：天然單細(xì)胞懸液。當(dāng)有血凝塊時(shí)，應(yīng)用50μm尼龍網(wǎng)過濾，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和血涂片以判斷靶細(xì)胞群體是否仍然存在。一般采取密度梯度離心法。

　　(二)培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備

　　貼壁生長的單層細(xì)胞需要用蛋白酶消化后用機(jī)械法分離。

　　(三)新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備

　　一般采取機(jī)械法、酶處理法、化學(xué)試劑處理法和表面活性劑處理法等方法。分離不僅是要獲得最大產(chǎn)量的單細(xì)胞懸液，還要盡量保證細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和抗原性。大多數(shù)淋巴樣組織可用輕柔的機(jī)械方法快速分離，并保持收獲細(xì)胞的相對(duì)完整。某些組織由于細(xì)胞間連接緊密，需在機(jī)械分離的基礎(chǔ)上用蛋白水解酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶。骨髓標(biāo)本亦可能因骨細(xì)胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要確認(rèn)酶的使用沒有改變、減弱靶抗原的表達(dá)，細(xì)胞活性沒有顯著降低。

　　(四)單細(xì)胞懸液的保存

　　常用的處理方法有三種：

　　1.深低溫保存法。

　　2.乙醇或甲醇保存法。

　　3.甲醛或多聚甲醛固定法。

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