2014主管檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：總蛋白定量測(cè)定

　　1、原理

　　磺基水楊酸為生物堿試劑，能沉淀蛋白質(zhì)，但對(duì)白蛋白的沉淀能力比球蛋白強(qiáng)，加適量硫酸鈉后，沉淀白、球蛋白的能力趨于一致，與標(biāo)準(zhǔn)蛋白濁度對(duì)比進(jìn)行定量測(cè)定。

　　2、試劑

　　磺基水楊酸～硫酸鈉試劑(SS～S)

　　磺基水楊酸3.0g

　　無(wú)水硫酸鈉7.0g

　　蒸餾水加至100ml

　　過(guò)濾后，儲(chǔ)存于棕色瓶中，如顯色或混濁則不能用。

　　3、方法

　　(1)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀釋混合人血清標(biāo)準(zhǔn)系列各0.5ml，加SS～S試劑4.5ml，充分混勻，7～15分鐘后，用420nm波長(zhǎng)比濁，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(2)樣品檢測(cè)取待測(cè)腦脊液標(biāo)本各0.5ml于兩只試管中，其中一只試

　　管加SS～S試劑4.5ml，另一試管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作為標(biāo)本空白管。在與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下比濁，所得得吸光度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得蛋白質(zhì)濃度。

　　4、注意事項(xiàng)

　　(1)腦脊液如有多量細(xì)胞或混濁，應(yīng)先離心以除去。如蛋白質(zhì)濃度過(guò)高，應(yīng)先行用生理鹽水稀釋后重新測(cè)定。

　　(2)加入SS～S試劑的操作手法和速度、室溫及比濁前的放置時(shí)間都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。故操作時(shí)應(yīng)注意控制加入試劑的方式和比濁時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)管一致。應(yīng)隨氣溫改變，勤作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　5、正常參考值

　　腰穿CSF蛋白含量：0.2～0.4g/L池穿CSF蛋白含量：0.1～0.25g/L

　　側(cè)腦室穿刺CSF蛋白含量：0.05～0.15g/L

　　腦脊液蛋白質(zhì)含量與年齡成正比，兒童含量較低，成人稍高，老年人又比成年人高。

　　6、臨床意義

　　腦脊液蛋白質(zhì)含量增高，為血腦屏障被破壞的標(biāo)志。頗受臨床工作者的重視。

　　蛋白質(zhì)含量增高常見于下列情況：

　　(1)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥。腦部感染時(shí)，腦膜和脈絡(luò)叢毛細(xì)血管通透性增加，蛋白質(zhì)分子容易透過(guò)，首先是白蛋白增高，隨后是球蛋白和纖維蛋白增高。

　　(2)神經(jīng)根病變。如急性感染性多發(fā)性神經(jīng)炎(Guillain～Barre綜合征)，多數(shù)病例有蛋白質(zhì)增高，而細(xì)胞數(shù)正常或接近正常，即蛋白～細(xì)胞分離現(xiàn)象。

　　(3)椎管內(nèi)梗阻。腦與蛛網(wǎng)膜下腔互不相通，血漿蛋白由脊髓中的靜脈滲出，CSF蛋白質(zhì)含量顯著增高，有時(shí)高達(dá)30～50g/L，這時(shí)CSF變黃，可自行凝固。如脊髓腫瘤、轉(zhuǎn)移癌、粘連性蛛網(wǎng)膜炎等。此外，早產(chǎn)兒CSF蛋白含量可達(dá)2g/L，新生兒為0.8～1.0g/L，出生兩個(gè)月后逐漸降至正常水平。

　　含血的CSF蛋白質(zhì)含量增高。為了鑒別原來(lái)有無(wú)蛋白質(zhì)增高，可用每升紅細(xì)胞700×106個(gè)約相當(dāng)增加蛋白質(zhì)量0.01g/L來(lái)推算，用含血CSF的蛋白質(zhì)含量減去含紅細(xì)胞數(shù)折算成的蛋白質(zhì)含量，即為原來(lái)CSF的蛋白質(zhì)含量。

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