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精子的功能檢查
精子的功能檢查目前應(yīng)用的是精子低滲腫脹試驗(yàn)(HOS)。
1.檢測方法：將精子置入低滲溶液中，由于滲透壓改變，精子為維持內(nèi)外體液間的平衡，水分可通過精子膜進(jìn)入精子，由于精子尾部的膜更柔軟、疏松，所以尾部可腫脹或彎曲。用相差顯微鏡觀察，計(jì)算100～200個(gè)精子中出現(xiàn)腫脹的百分率。
2.結(jié)果判斷：a型，未出現(xiàn)腫脹;b型，尾尖腫脹;c型，尾尖彎曲腫脹;d型，尾尖腫脹伴彎曲腫脹;e型，尾彎曲腫脹;f型，尾粗短腫脹;g型，全尾部腫脹。
3.參考值：g型腫脹精子率>50%。
4.臨床意義：精子尾部低滲腫脹試驗(yàn)可作為體外精子膜功能及完整性的評估指標(biāo)，預(yù)測精子潛在的受精能力。有研究表明，不育癥的精子尾部腫脹率明顯減低。
免疫細(xì)胞的分離
(1)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血中單個(gè)核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)的比重與紅細(xì)胞、多核白細(xì)胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。
(2)淋巴細(xì)胞的分離1)純淋巴細(xì)胞群的采集：利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時(shí)，能主動(dòng)粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個(gè)核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞，從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。
2)淋巴細(xì)胞亞群的分離原則：選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇法。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結(jié)合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。
(3)淋巴細(xì)胞的保存與活力測定①短期保存技術(shù)：短期保存可置于4℃保存。
�、陂L期保存技術(shù)：液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞，加入二甲亞砜作為保護(hù)劑。
�、刍盍y定：最簡便常用的為臺(tái)盼藍(lán)染色法，呈藍(lán)色。
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