2014檢驗(yàn)技師檢驗(yàn)基礎(chǔ)講解：血涂片制備與染色

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　　血涂片制備與染色

　　血涂片是通過特定的方法將血液按一定方向均勻涂開的過程，微觀上使細(xì)胞是由球形變?yōu)槠矫嫘位蚪�平面形平鋪在載玻片上。血涂片的顯微鏡檢查是血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本步驟，特別是對于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價值。血涂片制備是否合格、染色的好壞直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。

　　(一)血涂片制備

　　1.載玻片的準(zhǔn)備

　　新載玻片常帶有游離堿質(zhì)，須用濃度為lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水徹底沖洗，干燥后備用。舊載玻片要用含洗滌劑的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反復(fù)沖洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥備用。

　　使用載玻片時，不要用手觸及玻片表面，保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩。

　　2.血涂片制作方法

　　取血液標(biāo)本一滴置載玻片的一端，以邊緣平滑的推片一端，從血滴前沿方向接觸血液，使血液沿推片散開，推片與載玻片保持30～45○夾角，平穩(wěn)地向前推動，血液即在載玻片上形成薄層血膜。

　　涂片的厚薄與血滴大小、推片與載玻片之間的角度、推片時的速度及血細(xì)胞比容有關(guān)。血滴大、角度大、速度快則血膜越厚;反之則血膜越薄。

　　一張良好的血涂片，要求厚薄適宜，頭體尾明顯，細(xì)胞分布均勻，血膜邊緣整齊并留有的空隙。

　　(二)血涂片染色

　　染色的目的是使細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等染上不同的顏色，以便于鏡下觀察識別。

　　血涂片染色包括兩個過程：固定和染色。固定是將細(xì)胞蛋白質(zhì)和多糖等成分迅速交聯(lián)凝固，以保持細(xì)胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。常用的染色方法有瑞特染色法(Wright)、姬姆薩染色法(Giemsa)等。

　　1.瑞特(Wright)染色法

　　本法的特點(diǎn)是將固定和染色合并在一起進(jìn)行，手續(xù)簡便，染色時間短，對白細(xì)胞特異性顆粒著色較好，但對核的著色略差。

　　2.姬姆薩(Giemsa)染色法姬姆薩染料由天青和酸性染料伊紅組成的復(fù)合染料。染色原理、緩沖液與瑞特染色法大致相同。本法對細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更為清晰，但細(xì)胞質(zhì)和顆粒著色較差。

　　3.瑞-姬染色法

　　瑞特染色液和姬姆薩染色液對細(xì)胞進(jìn)行染色時有各自的顯色特征，前者對細(xì)胞漿和顆粒著色較好，后者對對細(xì)胞核結(jié)構(gòu)顯示清晰。因此將瑞特染料和姬姆薩染料混合，甲醇溶解后組成瑞-姬染色液能取長補(bǔ)短，優(yōu)勢互補(bǔ)，其中所使用的緩沖液與瑞特染色法相同。用該混合染液對血細(xì)胞進(jìn)行染色，細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞內(nèi)顆粒著色均有上佳表現(xiàn)，著色鮮艷，對比鮮明，是臨床上廣泛使用的方法。

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