一、A1

　　1、

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長為450nm。

　　2、

　　【正確答案】 E

　　【答案解析】 OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。

　　3、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長為450nm。

　　4、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 用于酶免疫技術(shù)的HRP，其RZ值應(yīng)大于3.0。

　　5、

　　【正確答案】 E

　　【答案解析】 1.酶的活性要強，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，純度高。

　　2.易與抗體或抗原偶聯(lián)，標記后酶活性保持穩(wěn)定，且不影響標記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性。

　　3.作用專一性強，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標記酶相同的內(nèi)源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測定的酶還要求當抗體與酶標抗原結(jié)合后，酶活性可出現(xiàn)抑制或激活。

　　4.酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。

　　6、

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 酶免疫測定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標記物而分為均相和異相這兩類。

　　7、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 酶增強免疫測定技術(shù)(EMIT)是均相酶免疫測定技術(shù)。EMIT的基本原理：半抗原與酶結(jié)合成酶標半抗原，保留半抗原和酶的活性，當酶標半抗原與抗體結(jié)合后，所標的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響而活性被抑制，反應(yīng)后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果可推算出標本中半抗原的量。

　　8、

　　【正確答案】 C

　　【答案解析】 均相酶免疫測定是將半抗原或小分子抗原如藥物、激素、毒品、興奮劑等與酶結(jié)合制成酶標記物，酶與抗原(半抗原)結(jié)合后仍保留酶和抗原(半抗原)的活性。均相酶免疫測定操作簡便、快速、適合于自動化，應(yīng)用廣泛，不僅可檢測藥物、激素、毒品、興奮劑等半抗原或小分子抗原，也可測定大分子蛋白質(zhì)、病毒及細胞性抗原成分。

　　最大缺點是易受樣品中非特異的內(nèi)源性酶、酶抑制藥及交叉反應(yīng)物的干擾，而且由于采用競爭性結(jié)合分析原理，靈敏度不及異相酶免測定。

　　9、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 在雙位點一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合，而不再形成夾心復合物，所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　10、

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 許多化合物可作為HRP的供氧體，在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(FMB)和ABTS。OPD為在ELISA中應(yīng)用最多的底物，靈敏度高，比色方便。

　　11、

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有戊二醛交聯(lián)法、過碘酸鹽氧化法和標記抗體鑒定法。

　　12、

　　【正確答案】 D

　　【答案解析】 斑點免疫層析試驗以硝酸纖維素為載體，利用微孔濾膜的毛細管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，猶如層析一般。

　　13、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 化學發(fā)光是吸收了化學能使分子激發(fā)而發(fā)射的光，而熒光是吸收了光能使分子激發(fā)而發(fā)射的光。

　　14、

　　【正確答案】 C

　　【答案解析】 鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng),是指由于抗原抗體比例不合適而導致假陰性的現(xiàn)象，其中抗體過量叫做前帶效應(yīng);抗原過量叫做后帶效應(yīng)。在等價帶前后分別為抗體、抗原過剩則影響沉淀物的形成，這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象。帶現(xiàn)象在臨床檢驗中經(jīng)常出現(xiàn)，特別是ELISA反應(yīng)中。出現(xiàn)在抗體過量時，稱為前帶，出現(xiàn)在抗原過剩時，稱為后帶。所以在臨床工作中一定要注意前帶和后帶現(xiàn)象，以免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，尤其以前帶效應(yīng)明顯，這種情況可以通過進一步稀釋樣本進行解決。

　　15、

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 均相酶免疫測定方法有酶增強免疫測定技術(shù)(EMIT)和克隆酶供體免疫分析方法。其中，酶增強免疫測定技術(shù)是最早取得實際應(yīng)用的酶免疫測定方法。

　　16、

　　【正確答案】 C

　　【答案解析】 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理是利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，只要更換不同的固相抗原，就可以用一種酶標抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。

　　17、

　　【正確答案】 E

　　【答案解析】 免疫滲濾試驗和免疫層析試驗具有簡便、快速、單份測定、可立等結(jié)果等優(yōu)點，無需任何儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定，因此多用于急診檢驗。這類試驗不能準確定量，所以主要限于檢測正常體液中不存在的物質(zhì)以及正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質(zhì)。目前臨床檢驗中已開展的項目有HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新項目正在不斷發(fā)展中。

　　18、

　　【正確答案】 D

　　【答案解析】 ELISA是在固相載體上包被抗原或抗體后，通過抗原抗體反應(yīng)使酶標抗體(或酶標抗原)結(jié)合到載體上，經(jīng)洗滌使結(jié)合的酶標抗體和游離的酶標抗體分離，洗去游離的酶標抗體(或酶標抗原)。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體。②酶標記的抗原或抗體。③酶作用的底物。間接法和捕獲法還使用稀釋的血清標本做試劑。戊二醛是一種雙功能團試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而耦聯(lián)。與ELISA的方法相反。

　　19、

　　【正確答案】 E

　　【答案解析】 影響發(fā)光劑標記的因素有被標記蛋白的性質(zhì)、原料比、標記率、溫度。

　　20、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 在ELISA中，常用的酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)。應(yīng)用AP系統(tǒng)，其敏感性一般高于應(yīng)用HRP系統(tǒng)，空白值也較低。但由于AP較難得到高純度制劑，穩(wěn)定性較HRP低，價格較HRP高，制備酶結(jié)合物時得率較HRP低等原因，國內(nèi)在ELISA中一般均采用HRP。

　　21、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 酶免疫技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。最常用的固相載體物質(zhì)是聚苯乙烯。

　　22、

　　【正確答案】 C

　　【答案解析】 將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液(最常用的為pH9.6的碳酸緩沖液)中，加于ELISA板孔中在4℃過夜，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色而導致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過程稱為封閉。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時間而不失去其免疫活性。

　　23、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的位點一步法是在雙抗體夾心法測定抗原時，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則可如圖中所示，在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。此法不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

　　24、

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 ELISA抗體夾心法檢測抗原A時，固相載體的包被物是未標記的抗A抗體。

　　二、B

　　1、

　　【正確答案】 C

　　【答案解析】 自身紅細胞凝集試驗可用于HIV抗體、HBsAg的檢測，靈敏度與間接血凝試驗相仿。

　　【正確答案】 A

　　【答案解析】 免疫印跡法在艾滋病病毒感染中作為確診試驗。

　　【正確答案】 E

　　【答案解析】 免疫組織化學技術(shù)是指酶標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)的抗原進行定性、定位和定量測定的一項技術(shù)。

　　【正確答案】 B

　　【答案解析】 檢測抗原最常用的方法是ELISA(雙抗體夾心法)。

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