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強(qiáng)心苷的提取分離
(一)提取
提取原生苷，首先要注意抑制酶的活性，防止酶解，提取時(shí)避免酸堿的影響。提取次生苷，可利用酶解或酸水解的方法，提高目標(biāo)提取物的產(chǎn)量。
常用甲醇或70~80%的乙醇作溶劑。原料含脂類雜質(zhì)較多時(shí)，可先用石油醚或溶劑汽油脫脂;原料含葉綠素較多時(shí)，可用稀堿液皂化法，靜置析膠法，活性炭吸附法除去葉綠素。
(二)分離
強(qiáng)心苷濃縮液，可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇(乙醇)溶液依次萃取，將強(qiáng)心苷按極性大小分為幾部分，再采用溶劑萃取法、逆流分溶法和色譜分離法分離。分離親脂性單糖苷、次苷和苷元，一般選用吸附色譜，常以硅膠和氧化鋁為吸附劑。
強(qiáng)心苷水解反應(yīng)
化學(xué)方法主要有酸水解，堿水解;生物方法有酶水解。
1.酸水解：
·溫和酸水解：對苷元影響小，不致引起脫水反應(yīng)，對不穩(wěn)定的α-去氧糖亦不致分解，故常得到雙糖和叁糖。此法不適用于16位有甲酰基的洋地黃強(qiáng)心苷類。
·強(qiáng)烈酸水解：增加作用時(shí)間或同時(shí)加壓才能得到一定量葡糖，但易得到縮水苷元。
·氯化氫丙酮法：此法適用于多數(shù)Ⅱ型強(qiáng)心苷水解，得到原生苷元和糖衍生物。
2.酶水解：能水解除去分子中的葡萄糖而保留α-去氧糖。
3.堿水解：堿試劑可使強(qiáng)心苷分子中的�；�，內(nèi)酯環(huán)裂開、△20(22)轉(zhuǎn)位及苷元異構(gòu)化等。
·酰基水解：水解脫去強(qiáng)心苷中�；�。
·內(nèi)酯環(huán)的水解：水溶液中，NaOH或KOH可使內(nèi)酯環(huán)開裂，酸化后又閉環(huán);醇溶液中，NaOH或KOH使內(nèi)酯環(huán)開環(huán)并異構(gòu)化，酸化后亦不可逆。
強(qiáng)心苷·顏色反應(yīng)
根據(jù)顏色反應(yīng)發(fā)生在分子的不同部位可以分為以下數(shù)種：
作用于甾體母核的反應(yīng) 一般在無水條件下經(jīng)酸作用，能產(chǎn)生各種顏色反應(yīng)。常見有：
乙酐濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)：取樣品溶于冰乙酸，加濃硫酸-乙酐(1∶20)數(shù)滴→紅→紫→藍(lán)→綠→污綠等變化，最后褪色。
Salkowski反應(yīng)：將樣品溶于氯仿，加濃硫酸靜置，;硫酸層呈血紅色或藍(lán)色，氯仿層有綠色熒光。
Tschugaev反應(yīng)：取樣品溶于冰乙酸，加幾粒氯化鋅及乙酰氯共熱，或取樣品溶于氯仿，加冰乙酸、乙酰氯和氯化鋅煮沸，反應(yīng)液呈紫紅→藍(lán)→綠的變化。
Rosen-Heimer反應(yīng)：將樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至60℃呈紅色至紫色。
Kahlenberg反應(yīng)：將樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，噴20%五氯化銻的氯仿溶液(不含乙醇和水)，于60~70℃加熱3～5min即可顯灰藍(lán)、藍(lán)、灰紫等顏色。
作用于α、β不飽和內(nèi)酯環(huán)的反應(yīng) 可用于區(qū)別甲、乙型強(qiáng)心苷。甲型強(qiáng)心苷在堿性醇溶液中，能與下列活性亞甲基試劑作用而顯色，乙型強(qiáng)心苷無此類反應(yīng)。
Legal(亞硝酰鐵氰化鈉)反應(yīng)：取樣品1～2mg，溶在2～3滴吡啶中，加1滴3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液和1滴2mol/L的氫氧化鈉溶液，反應(yīng)液呈深紅色并漸漸褪去。
Raymond(間二硝基苯)反應(yīng))：取樣品約1mg，以少量50%乙醇溶解后加1%間二硝基苯乙醇溶液0.1ml，搖勻后再加20%NaOH溶液0.2ml →紫紅色。
Kedde(3，5-二硝基苯甲酸)反應(yīng))：取樣品的醇溶液于試管中，加3，5-二硝基苯甲酸試劑3～4滴 →紅色或紫紅色。
Baljet(堿性苦味酸試劑)反應(yīng))：取樣品的醇溶液于試管中，加入堿性苦味酸試劑數(shù)滴 →橙色或橙紅色。
以上反應(yīng)均呈紅或紫紅、橙紅色。
作用于α-去氧糖的反應(yīng)
Keller-Kiliani(K-K)反應(yīng) 乙酸層顯藍(lán)色…此反應(yīng)是α-去氧糖的特征反應(yīng)，對游離的α-去氧糖或α-去氧糖與苷元連結(jié)的苷都能呈色。
占噸氫醇反應(yīng) 取樣品少許，加占噸氫醇試劑1ml，置沸水浴中3min，只要分子中有α-去氧糖都能呈紅色。本反應(yīng)非常靈敏，可用于定量。
對-二甲氨基苯甲醛反應(yīng) 將樣品的醇溶液點(diǎn)在濾紙上，噴對-二甲氨基苯甲醛試劑，于90℃加熱30s，分子中含α-去氧糖的強(qiáng)心苷可顯灰紅色斑點(diǎn)。
過碘酸-對硝基苯胺反應(yīng) 取樣品的醇溶液點(diǎn)在濾紙上，先噴過NaIO3水溶液，于室溫放置10min，再噴對硝基苯胺試液，則迅速在灰黃色背底上出現(xiàn)深黃色斑點(diǎn)，置紫外光下觀察則為棕色背底上現(xiàn)黃色熒光斑點(diǎn)。如再噴以5%NaOH甲醇溶液，則色點(diǎn)轉(zhuǎn)為綠色。
強(qiáng)心苷波譜分析
強(qiáng)心苷元的UV光譜
具有△αβ五元內(nèi)酯環(huán)的強(qiáng)心苷元即甲型強(qiáng)心苷元在217～220nm(logε4.20-4.24)處呈現(xiàn)最大吸收。
具有△αβ，δ六元內(nèi)酯環(huán)的強(qiáng)心苷元即乙型強(qiáng)心苷元在295～300nm (logε約3.93)處有特征吸收。
強(qiáng)心苷元的IR光譜
△αβ五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的γC=O峰為特征吸收峰，一般在1800～1700cm-1處有兩個(gè)強(qiáng)吸收峰，其中在低波數(shù)的為正常的吸收峰，在高波數(shù)的為非正常的吸收峰。
△αβ，γδ六元內(nèi)酯環(huán)的強(qiáng)心苷元的C=O紅外吸收峰與五元內(nèi)酯環(huán)相同，也有兩個(gè)吸收峰，但由于環(huán)內(nèi)共軛程度增高，導(dǎo)致兩個(gè)吸收峰向低波數(shù)位移。
NMR譜
1H-NMR光譜：可用來判斷甲基、醛基、羥甲基等上的質(zhì)子特征，具體信號(hào)特征如下：
1.△αβ-γ-內(nèi)酯環(huán)：C22-H在δ6.00～5.60內(nèi)，呈寬的單峰，C21-2H在δ5.00～4.50ppm內(nèi)，呈AB型四重峰，J=18Hz，或?qū)拞畏寤蛉胤濉?/P>
2.C10和C13上的甲基在δ1.00ppm左右均為單峰。
3.C10上連結(jié)的醛基在δ10.0～9.50ppm內(nèi)為單峰。
4.C10上連結(jié)的羥甲基乙酰化后，在δ4.50～4.00ppm內(nèi)呈AB型四重峰，J=12Hz。
5.C16位上無含氧取代時(shí)，該位上的二個(gè)質(zhì)子在δ2.50～2.00ppm內(nèi)呈m峰，C17-H在δ2.80ppm左右，為m峰或dd峰，J=9.5Hz。
6.C3-H為m峰，在苷元中約在δ3.90ppm，成苷后向低場位移。
7.糖部分除常見的糖外還有一些特殊的糖，均有一些特征信號(hào)可以識(shí)別。
13C-NMR光譜： 對研究強(qiáng)心苷結(jié)構(gòu)也十分有用，此外還有下列用途：
1. 根據(jù)13C-NMR可以用來判斷甾體A/B環(huán)的構(gòu)象。
2. C3-OH的構(gòu)型也可用13C-NMR來判斷。
3. 可以確定強(qiáng)心苷分子中各糖基連接順序。
4. 可以判斷強(qiáng)心苷中糖基之間的連接位置。
MS譜
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