2014臨床檢驗技師綜合輔導：離心方法分型

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　　離心方法分型

　　離心技術是利用物體高速旋轉時產生強大的離心力，使置于旋轉體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉子高速旋轉時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降;如果顆粒密度低于周圍介質的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。

　　根據離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：

　　1.差速離心法。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。

　　2.密度梯度離心法。離心前，離心管內先裝入分離介質(如蔗糖、甘油等)，使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：

　　1)速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。

　　2)預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質，常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。

　　3)自成梯度等密度離心法。某些密度介質經過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經長時間離心后也可產生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合，離心開始后，梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。

　　3.沉降平衡離心法。根據被分離物質的浮力密度差別進行分離，所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度，介質在離心過程中形成密度梯度，被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。

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