(1)泡沫試驗(yàn):取檢品的水溶液2ml于帶塞試管中,用力振搖3分鐘,即產(chǎn)生持久性蜂窩狀泡沫(維持10分鐘以上),且泡沫量不少于液體體積的1/3。
【注】常用的增溶劑吐溫、司盤,振搖時(shí)均能產(chǎn)生持久性泡沫,要注意區(qū)別。
(2)溶血試驗(yàn):取試管4支,分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml,然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5 ml,使每一個(gè)試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2%的血細(xì)胞懸液2.5ml,振搖均勻后,同置于37℃水浴或25-27℃的室溫中注意觀察溶血情況,一般觀察3小時(shí)即可,或先滴紅細(xì)胞于顯微鏡下,然后滴加檢液看血細(xì)胞是否消失。如有溶血現(xiàn)象示正反應(yīng)。
【注】①鞣質(zhì)對(duì)血紅細(xì)胞有凝集作用,干擾溶血試驗(yàn)的觀察,應(yīng)事先除去(可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀)。 ②檢液應(yīng)為中性溶液。
(3)醋酐濃硫酸試驗(yàn)(Liebrmann Burchard反應(yīng))取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中,于水浴上蒸干,殘?jiān)尤肷倭勘姿崾谷芙猓偌尤氪佐麧饬蛩?19:1)試液,呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色(甾類、三萜類成分或皂甙)
(4)區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙:取帶塞試管兩支,各盛檢品的水溶解1 ml,1支加0.1N鹽酸溶液2ml,另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘(需左右手交替振搖各半分鐘),觀察兩管泡沫的多少,若兩管泡沫體積相同或酸管多,示含三萜式皂甙;若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙。
三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫;甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。
濃硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、濃硫酸-香草醛等的顯色原理主要是使羧基脫水,增加雙鍵結(jié)構(gòu),再經(jīng)雙鍵位移,雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng),又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。
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