執(zhí)業(yè)藥師藥物分析知識點:酶液的濃縮
提取的酶液為減少純化操作容積,通常先進行濃縮。工業(yè)上可用真空減壓濃縮、薄膜濃縮、冷凍濃縮和逆向滲透作用進行濃縮。對于少量酶液下述方法濃縮更合適:
用葡聚糖凝膠(分子篩)濃縮:取相當(dāng)于酶液量1/5的干葡聚糖凝膠G15或G25,分次加入酶液中,攪拌30min,使凝膠吸水膨脹,進行吸濾。經(jīng)重復(fù)數(shù)次操作即可在短時間內(nèi)把酶液濃縮至所需的體積。也可將酶液裝于透析袋內(nèi),埋入干凝膠中,袋內(nèi)酶液也可得到濃縮。
用聚乙二醇濃縮:將稀酶液裝入透析袋內(nèi),袋外復(fù)以聚乙二醇,袋內(nèi)水份被袋外的聚乙二醇所吸收,在短時間內(nèi)可以達到濃縮的目的,得到所需的濃酶液。
用超濾法濃縮:超濾技術(shù)在其可篩分范圍內(nèi)分離酶分子時不發(fā)生“相態(tài)”變化,可以避免酶蛋白變性,且分離度快,所以愈來愈被廣泛采用。各種不同孔徑的超濾膜,適用于實驗室規(guī)模及一定工業(yè)規(guī)模的酶液濃縮。如國產(chǎn)二醋酸纖維素制成10~200埃孔徑的超濾膜,用于實驗室規(guī)模固氮酶液的脫鹽和濃縮,效果良好。