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2017年執(zhí)業(yè)藥師《藥物分析》考試章節(jié)知識點(14)

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第 1 頁:第一節(jié) 薄層色譜法
第 2 頁:第二節(jié) 氣相色譜法和高效液相色譜法
第 3 頁:第三節(jié) 電泳法

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  第六章 色譜法

  色譜法是一種物理或物理化學分離分析方法。先將混合物中各組分分離而后逐個分析,是分析混合物最有力的手段。具有高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快、應用范圍廣等優(yōu)點。

  色譜過程是物質(zhì)分子在相對運動的兩相(固定相和流動相)間分配平衡的過程,可用分配系數(shù)K和容量因子k描述。

  例題:色譜過程使物質(zhì)分子在; A.溶液中達到平衡的過程B. 兩相中平衡的過程C. 固定相中分配的過程 D. 流動相中溶解的過程

  E. 相對運動的兩相(流動相與固定相)間分配平衡的過程 答案: E

  1.分配系數(shù)K=Cs/Cm,與組分、固定相和流動相性質(zhì)和溫度有關(guān)。

  2.容量因子k=Ws/Wm,不僅與組分、固定相和流動相性質(zhì)和溫度有關(guān),還與兩相體積有關(guān)。容量因子不等是色譜分離的先決條件。

  3.色譜過程方程:保留時間與分配系數(shù)關(guān)系tR=t0(1+k)

  第一節(jié) 薄層色譜法

  掌握薄層色譜法的基本原理、操作方法以及在藥物鑒別、檢查中的應用。

  一、基本原理

  1.吸附薄層色譜:吸附劑對不同組分A和B具有不同吸附能力,展開劑也對A和B有不同溶解、解吸能力,當展開劑不斷展開, A、B在吸附劑和展開劑之間連續(xù)不斷吸附解吸,產(chǎn)生差速遷移得到分離。

  2.比移值:Rf=l/l0,為組分遷移距離與展開劑遷移距離之比

  比移值的最佳范圍是0.3~0.5,可用范圍是0.2~0.8。

  影響比移值因素:①被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。極性較強的組分Rf較小。②薄層板性質(zhì)。吸附劑活性越強,吸附作用就越強,Rf越小。③展開劑性質(zhì)。極性越強展開劑Rf值增大④展開劑蒸氣飽和度對Rf也有較大影響。

  3.分離度:R=2d/(W1+W2),兩相鄰斑點中心距離與兩斑點平均寬度的比值

  二、操作方法

  1.吸附劑和展開劑的選擇

  (1)吸附劑:常用有硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土等。硅膠、氧化鋁的活性與含水量有關(guān),含水量高,活性低,吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氫鍵,選擇性高。

  (2)展開劑:極性較強的展開劑適用于極性較強組分的洗脫;極性較弱的展開劑適用于極性較弱組分的洗脫。加入少量酸、堿可以使極性物質(zhì)斑點集中,減少拖尾,提高分離度。

  選擇一般原則是,分離極性較強組分時選用活性低的薄層板,以極性強的展開劑展開。分離弱極性組分時,宜選用活性高的薄層板,以極性弱的展開劑展開。調(diào)整待測組分Rf0.3~0.5范圍內(nèi)。

  2.薄層板制備:1份固定相與3份水混和涂布,110℃烘30分鐘。

  3.點樣與展開:點樣一般為直徑2~4mm圓點,距底2.0cm;展開距離一般為10~15cm。

  4.斑點定位:有色可直接觀察;有熒光在紫外燈下觀察;噴灑顯色劑使組分顯色。

  三、應用 1.鑒別:比較供試品與對照品溶液的比移值 2.雜質(zhì)檢查:雜質(zhì)對照品比較法;高低濃度對比法

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