第 1 頁(yè):第一節(jié) 乙型腦炎病毒 |
第 4 頁(yè):第二節(jié) 登革病毒 |
第 5 頁(yè):第三節(jié) 森林腦炎病毒 |
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第二十九單元 黃病毒
黃病毒屬(Flavivirus)是一大群具有包膜的單正鏈RNA病毒。這類病毒通常通過(guò)吸血的節(jié)肢動(dòng)物(蚊、蟬、白嶺等)傳播,故過(guò)去曾歸類為蟲媒病毒(arbovirus)。由于“蟲媒病毒”一詞在分類學(xué)中含義不夠準(zhǔn)確,所以現(xiàn)在已經(jīng)不再使用。在我國(guó),主要的黃病毒成員有乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒和登革病毒。與黃病毒許多性狀相似,亦通過(guò)節(jié)股動(dòng)物傳播,但基因組結(jié)構(gòu)及復(fù)制方式不同的甲病毒屬主要分布在美洲和非洲,重要的成員有東部馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒和委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒。以往認(rèn)為,我國(guó)不存在甲病毒感染。近年研究發(fā)現(xiàn)新疆、云南、貴州等地區(qū)人群亦有不同程度的甲病毒屬(辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、東部馬腦炎病毒)感染。
第一節(jié) 乙型腦炎病毒
流行性乙型腦炎(epidemic encephalitis B)是由嗜神經(jīng)的乙腦病毒所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)性傳染病,簡(jiǎn)稱乙腦。經(jīng)蚊等吸血昆蟲傳播,流行于夏秋季,多發(fā)生于兒童,臨床上以高熱、意識(shí)障礙、驚厥、呼吸衰竭及腦膜刺激征為特征。部分患者留有嚴(yán)重后遺癥,重癥患者病死率較高。本病毒首先(1935年)在日本乙腦患者腦組織中分離獲得,因此又稱日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),所致疾病在日本稱日本乙型腦炎。1940年我國(guó)從腦炎死亡病人的腦組織中分離出乙腦病毒,證實(shí)本病的存在。除新疆、西藏、青海外,全國(guó)各地均有病例發(fā)生,年發(fā)病人數(shù)2.5萬(wàn),病死率10%,大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。
一、生物學(xué)性狀
(一)形態(tài)與結(jié)構(gòu)
乙腦病毒屬黃病毒科(Flaviviridae),呈球形,有包膜的圓形病毒顆粒的直徑約為40nm。核心含單股正鏈RNA,該病毒的完整基因組序列已被測(cè)定,全長(zhǎng)約11kb,自5′至3′端依次編碼結(jié)構(gòu)蛋白C、M、E以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1~NS5,病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用,翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟,出芽釋放。內(nèi)有衣殼蛋白(C)與核酸構(gòu)成的核心,外披以含脂質(zhì)的包膜。在脂蛋白包膜表面有包膜糖蛋白(E)刺突,即病毒血凝素,能凝集雞、鵝、羊等動(dòng)物紅細(xì)胞?乖苑(wěn)定,但近年有報(bào)告以具有中和作用的單克隆抗體(McAb)檢測(cè)15株國(guó)內(nèi)的乙腦病毒時(shí),可將其分為4個(gè)抗原組。人和動(dòng)物感染本病毒后,均產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體,中和抗體和血凝抑制抗體。包膜內(nèi)還有內(nèi)膜蛋白(M),參與病毒的裝配。
(二)培養(yǎng)特征
小鼠和乳鼠是最常用的敏感動(dòng)物,對(duì)皮下感染途徑的易感性隨鼠齡的增長(zhǎng)而下降的,而腦內(nèi)接種的易感性影響不大。乳鼠腦內(nèi)接種乙腦病毒后3~4d發(fā)病,出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增高、肢體痙攣、麻痹等癥狀,1周左右死亡。感染腦組織內(nèi)含大量感染性病毒,制成10%懸液-20℃保存,可繼續(xù)接種、傳代,是分離病毒、大量制備抗原的可靠方法。
BHK-21 (幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)、白蚊伊蚊細(xì)胞(C6/36)、Vero等傳代細(xì)胞以及金黃色地鼠腎細(xì)胞、豬腎細(xì)胞、雞胚成纖維細(xì)胞等原代細(xì)胞是常用的敏感細(xì)胞,病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞圓縮、顆粒增多、細(xì)胞脫落等CPE。在培養(yǎng)上清中含有傳染性病毒,胞漿內(nèi)胞膜上可檢出特異性抗原。因細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒簡(jiǎn)便易行,已取代動(dòng)物培養(yǎng)方法制備疫苗、診斷抗原,以及研究病毒復(fù)制機(jī)理、篩選抗病毒藥物等。
(三)免疫原性
乙腦病毒抗原性穩(wěn)定,在同一地區(qū)不同年代分離的毒株之間未發(fā)現(xiàn)明顯的抗原變異。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位,可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體,在感染與免疫中具有重要作用。用單克隆抗體做交叉血凝抑制試驗(yàn)證實(shí),E糖蛋白上有與黃病毒屬成員廣泛交叉的屬特異性抗原,也有僅與墨里山谷腦炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、西尼羅腦炎病毒(West Nile virus)、圣路易腦炎病毒(St. louis encephalitis virus)交叉的特異性抗原。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結(jié)構(gòu)與功能,以及鑒定新分離的毒株,解決了常規(guī)免疫血清特異性低的問(wèn)題。
乙腦病毒包膜糖蛋白具有血凝特性,能凝集鵝、鴿和新生雛雞的紅細(xì)胞,在pH6.2~6.4條件下凝集效價(jià)高。病毒血凝素與紅細(xì)胞結(jié)合是不可逆的,但這種病毒與紅細(xì)胞形成的復(fù)合物仍有感染性,加入特異性抗體可抑制這種血凝現(xiàn)象。
(四)抵抗力
乙腦病毒對(duì)熱的抵抗力較弱,56℃30分鐘或100℃2分鐘即可滅活,故應(yīng)在-70℃條件下保存毒株。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃,其病毒活力可維持?jǐn)?shù)月。乙醚、1:1000去氧膽酸鈉以及常用消毒劑均可滅活病毒。在酸性條件下不穩(wěn)定,最適酸堿度為pH8.5~9.0。該病毒在外界環(huán)境中抵抗力不強(qiáng)。對(duì)低溫和干燥的抵抗力很強(qiáng),冷凍干燥后在4℃冰箱中可保存數(shù)年。
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