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2015年執(zhí)業(yè)藥師《藥物分析》復(fù)習(xí)必備知識(shí)點(diǎn)(5)

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第一節(jié) 體內(nèi)樣品種類

  血清、血漿的區(qū)別:加入抗凝劑后,全血離心制的血漿。不加抗凝劑,自然沉降后離心制的血清。

  考點(diǎn)3:尿液的分類與采集

  尿液的采集:測(cè)定尿液中藥物濃度——自然排尿、時(shí)間尿測(cè)定尿液中藥物總量——自然排尿、各時(shí)間段全部尿液

第二節(jié) 體內(nèi)樣品處理

  考點(diǎn)1:體內(nèi)樣品處理的常用方法(1)去除蛋白質(zhì)法(2)綴合物水解法(3)萃取分離法(4)化學(xué)衍生化法

  考點(diǎn)2:去除蛋白質(zhì)的方法:(1)蛋白質(zhì)沉淀法:加與水混溶的有機(jī)溶劑脫水、加入強(qiáng)酸生成不溶性鹽、加無機(jī)鹽鹽析(2)蛋白分解法——蛋白水解酶(枯草菌溶素)

  考點(diǎn)3:綴合物水解法(1)酸水解(HCl):簡便、快速,但專一性差(2)酶水解:β-葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶、兩者混合酶,專屬性高

  考點(diǎn)4:分離純化與濃集常用方法(1)液-液萃取——選用與水不相混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行提取(2)離子對(duì)萃取法(3)固相萃取法——利用柱色譜進(jìn)行分離

  考點(diǎn)5:化學(xué)衍生化法衍生化目的(1)增加組分的穩(wěn)定性(2)改善被測(cè)組分的色譜行為(3)增加被測(cè)物的檢測(cè)靈敏度和選擇性(4)提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體分離的能力衍生化方法(5)GC——硅烷化、酰化、烷基化(6)HPLC——熒胺、丹酰氯、鄰苯二醛(柱前衍生化、柱后衍生化)(7)手性衍生化法

第三節(jié) 體內(nèi)樣品測(cè)定

  考點(diǎn)1:常用測(cè)定方法

  考點(diǎn)2:定量分析方法驗(yàn)證(1)特異性內(nèi)源性物質(zhì)的干擾、代謝產(chǎn)物的干擾、同用藥物的干擾要求:6個(gè)不同來源的空白體內(nèi)樣品色譜圖、空白體內(nèi)樣品外加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖(注明濃度)及用藥后的體內(nèi)樣品色譜圖。(體外分析的專屬性)

  (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍要求:用至少6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同的生物介質(zhì),線性范圍要能覆蓋全部待測(cè)濃度,不允許將線性范圍外推求算未知樣品的濃度。隨行空白體內(nèi)樣品,但標(biāo)準(zhǔn)曲線不包括零點(diǎn)。(體外分析要求至少5個(gè)濃度)

  (3)定量下限標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)。S/N應(yīng)大于5.實(shí)際測(cè)定時(shí),滿足3~5個(gè)半衰期濃度,或Cmax1/10~1/20.至少5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。(體外分析要求S/N=10)

  (4)精密度與準(zhǔn)確度樣品選擇:選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在定量下限3倍以內(nèi),高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限附近;中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè)定5個(gè)樣品。

  精密度:批內(nèi)精密度、批間精密度(不同天連續(xù)制備3個(gè)分析批)。用RSD表示,要求小于15%,在最低定量限附近小于20%.準(zhǔn)確度:準(zhǔn)確度用相對(duì)回收率表示。一般應(yīng)在85%~115%范圍內(nèi),在最低定量限附近應(yīng)在80%~120%范圍內(nèi)。(體外分析要求95-105%)

  (5)樣品穩(wěn)定性表示一種分析物在確定條件下,一定時(shí)間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化學(xué)穩(wěn)定性。

  要求:根據(jù)具體情況,對(duì)含藥生物樣品(或儲(chǔ)備液、樣品處理液)在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察。

  (6)提取回收率分析過程的提取效率,能反映出樣品預(yù)處理過程中組分丟失的情況,是評(píng)價(jià)萃取方案優(yōu)劣的指標(biāo)之一。以樣品提取和處理過程前后分析物含量百分比表示。

  要求:考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率,其值一般應(yīng)一致,但重要的是重現(xiàn)性好。

  (7)質(zhì)控樣品在生物介質(zhì)中加入已知量待測(cè)藥物所配制的樣品,用于質(zhì)量控制。

  (8)質(zhì)量控制應(yīng)在生物樣品分析方法驗(yàn)證完成之后開始測(cè)試未知樣品,每個(gè)未知樣品一般測(cè)定一次,必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。

  每批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并平行測(cè)定高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。

  質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%.

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