| 第 1 頁(yè)：第一節(jié) 紫外—可見(jiàn)分光光度法 |
| 第 2 頁(yè)：第二節(jié) 熒光分析法 |
第二節(jié) 熒光分析法
一、基本原理
熒光的產(chǎn)生：此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量(如光能、化學(xué)能等)而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí)，過(guò)剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能，發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。
發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強(qiáng)度，除受激發(fā)光強(qiáng)度影響外，也與激發(fā)光的波長(zhǎng)有關(guān)。各個(gè)熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長(zhǎng)處有最大吸收峰和最大發(fā)射峰。選擇激發(fā)光波長(zhǎng)量接近于熒光分子的最大吸收峰
物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng)、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會(huì)有“自熄滅”作用，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。
二、熒光分光光度計(jì)
激發(fā)光源→激發(fā)光單色器→樣品池
↓
發(fā)射光單色器→檢測(cè)器→數(shù)據(jù)記錄處理
樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發(fā)射光方向與激發(fā)光成直角。
三、應(yīng)用
熒光分析可用于鑒別和含量測(cè)定。一般采用對(duì)照品比較法測(cè)定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線(xiàn)性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。
第三節(jié) 紅外分光光度法
一、基本原理
紅外光譜是由分子的振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)能極引起的光譜。當(dāng)用一定頻率的紅外光照射某物質(zhì)分子時(shí)，若該物質(zhì)的分子中某基團(tuán)的振動(dòng)頻率與它相同，則此物質(zhì)就能吸收這種紅外光，使分子由振動(dòng)基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。
因此，若用不同頻率的紅外光依次通過(guò)測(cè)定分子時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)不同強(qiáng)弱的吸收現(xiàn)象。用T%-λ作圖就得到其紅外光吸收光譜。紅外光譜具有很高的特征性，每種化合物都具有特征的紅外光譜。用它可進(jìn)行物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析和定量測(cè)定。
二、紅外光譜儀
光源-吸收池-單色器-檢測(cè)器-數(shù)據(jù)記錄和處理
三、紅外光譜與物質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)系
一般將振動(dòng)形式分成兩類(lèi)：伸縮振動(dòng)和變形振動(dòng)。
(1)伸縮振動(dòng)
表示。n 原子沿鍵軸方向伸縮，鍵長(zhǎng)發(fā)生變化而鍵角不變的振動(dòng)稱(chēng)為伸縮振動(dòng)，用符號(hào)ν
(2)變形振動(dòng)(又稱(chēng)彎曲振動(dòng)或變角振動(dòng))
基團(tuán)鍵角發(fā)生周期變化而鍵長(zhǎng)不變的振動(dòng)稱(chēng)為變形振動(dòng)，面內(nèi)變形振動(dòng)又分為剪式(以δ表示)和平面搖擺振動(dòng)。
紅外光譜區(qū)可分成4000 cm-1 ~1300cm-1和1300 cm-1 ~ 400 cm-1兩個(gè)區(qū)域。最有分析價(jià)值的基團(tuán)頻率在4000 cm-1 ~ 1300 cm-1 之間，這一區(qū)域稱(chēng)為基團(tuán)頻率區(qū)、官能團(tuán)區(qū)或特征區(qū)。區(qū)內(nèi)的峰是由伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的吸收帶，比較稀疏，容易辨認(rèn)，常用于鑒定官能團(tuán)。
四、應(yīng)用
1鑒別：紅外光譜特征性強(qiáng)，鑒別時(shí)按《藥品紅外光譜集》中收載的制備方法制備，與該品種對(duì)照?qǐng)D譜比較應(yīng)一致。
2.檢查：依據(jù)藥物與其同質(zhì)異晶雜質(zhì)在特定波數(shù)的吸收有顯著差異，對(duì)無(wú)效或低效晶型進(jìn)行檢查
【A型題】
1溶液的厚度不變時(shí)，吸收系數(shù)的大小取決于
A光的波長(zhǎng) B溶液濃度
C光線(xiàn)強(qiáng)弱 D溶液顏色
E儀器性能
參考答案B
2紫外分光光度法測(cè)定藥物含量時(shí)，應(yīng)采用
A石英管 B石英吸收池
C玻璃比色皿 D玻璃吸收池
E樣品室
參考答案B
3紫外-可見(jiàn)吸收光譜屬于
A電子躍遷光譜 B分子振動(dòng)光譜
C發(fā)射光譜 D熒光光譜
E原子吸收光譜
參考答案A
4在測(cè)定吸收度時(shí)，為消除溶劑及其他因素的影響，一般需用
A空白校正 B溶劑校正
C儀器校正 D波長(zhǎng)校正
E對(duì)照實(shí)驗(yàn)
參考答案A
5采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定藥物含量時(shí)，配制待測(cè)溶液濃度應(yīng)使
A測(cè)得吸收度盡量大
B吸收度大于0.1
C吸收度大于0.7
D吸收度在0.1～0.8
E吸收度在0.3～0.7
參考答案E
6紅外吸收光譜又稱(chēng)
A吸收光譜 B電子躍遷光譜
C分子振動(dòng)光譜 D分子轉(zhuǎn)動(dòng)光譜
E分子振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)光譜
參考答案E
7被分離組分在固定相與流動(dòng)相之間分配達(dá)到平衡時(shí)濃度比稱(chēng)為
A濃度比 B質(zhì)量比
C分配系數(shù) D容量因子
E質(zhì)量分配系數(shù)
參考答案C
8TLC的最佳Rf值范圍是
A0.1～0.9 B0.2～0.8
C0.3～0.5 D0.4～0.6
E0.3～0.7
參考答案C
9 HPLC最常用的檢測(cè)器是
A熱導(dǎo)檢測(cè)器
B電子捕獲檢測(cè)器
C氫火焰離子化檢測(cè)器
D熒光檢測(cè)器
E紫外檢測(cè)器
參考答案E
【B型題】
A3300～3000cm-1
B1300～1000cm-1
C1900～1650cm-1
D1000～650cm-1
E3750～3000cm-1
1νOH或νNH
2ν≡H
3νC-O
4νC=O
參考答案1E 2A 3B 4C
A峰高 B峰面積
C峰寬 D調(diào)整保留時(shí)間
E峰位
5用于定量測(cè)定的色譜參數(shù)
6用于衡量柱效的參數(shù)
7用于鑒別藥物的色譜參數(shù)
8被分離組分在固定相中停留時(shí)間
參考答案5B 6C 7E 8D
【X型題】
1用于藥物含量測(cè)定的紫外分光光度法
A吸收系數(shù)法 B計(jì)算分光光度法
C對(duì)照品比較法 D自身對(duì)照法
E靈敏度法
參考答案ABC
2TLC中影響Rf值的主要因素有
A被分離物質(zhì)特性 B薄層板性質(zhì)
C展開(kāi)劑性質(zhì) D展開(kāi)時(shí)間
E展開(kāi)室內(nèi)展開(kāi)劑的飽和度
參考答案ABCE
3中國(guó)藥典規(guī)定正文項(xiàng)下色譜條件不得任意改變者有
A檢測(cè)器種類(lèi) B固定液品種
C特殊指定的色譜材料
D進(jìn)樣量 E載氣
參考答案ABC
5內(nèi)標(biāo)法中內(nèi)標(biāo)物應(yīng)具備的條件
A保留時(shí)間與待測(cè)物相近
B與待測(cè)物分離度大于1.5
C符合要求的純物質(zhì)
D待測(cè)樣品中不含有的組分
E待測(cè)樣品與內(nèi)標(biāo)的相應(yīng)信號(hào)比值應(yīng)和待測(cè)樣品濃度成正比
參考答案ABCDE
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