2014執(zhí)業(yè)藥師《藥物分析》章節(jié)復習:第六章

　　第三節(jié) 高效液相色譜法

　　一、基本原理

　　1.基本概念

　　色譜峰參數：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)

　　保留值：保留時間、死時間、調整保留時間

　　峰寬：標準差、半峰寬、峰寬

　　2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉移過程，分解為間歇的在單個塔板中的分配平衡過程

　　理論塔板數 n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色譜柱的理論塔板數越多，柱效越高;同樣長度中塔板高度越小，柱效越高。

　　3.速率理論：主要說明使色譜峰擴張而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A為渦流擴散項。采用適當粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴散

　　B為縱向擴散系數。流動相為液體，柱溫為室溫，B/μ可忽略不計

　　C為傳質阻抗系數。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應適當減少固定液用量。

　　二、高效液相色譜儀

　　1.高壓輸液泵

　　2.色譜柱：分析型和制備型

　　3.進樣閥

　　4.檢測器

　　(1)選擇性檢測器：與待測物濃度、結構有關

　　①紫外檢測器：靈敏度、重復性及線性范圍較好，適用于具有共軛結構的化合物的檢測

　　②光二極管陣列檢測器：檢測原理相同，可同時記錄待測物吸收光譜，用于光譜鑒定和純度檢查

　�、蹮晒鈾z測器：靈敏，用于在流動相條件下具有熒光或經衍生轉化為具有熒光的化合物的檢測

　　④電化學檢測器：靈敏度高，僅用于在流動相條件下發(fā)生氧化-還原反應的化合物

　　⑤質譜檢測器：高靈敏度、高選擇性、分析范圍廣;不適用于小分子化合物，主要用于大分子物質如蛋白質、多肽的檢測

　　(2)通用性檢測器：質量型檢測器

　�、偈静钫酃鈾z測器：僅對少數物質如糖類靈敏度較高，受環(huán)境溫度影響大，實際應用少

　�、谡舭l(fā)光散射檢測器：適用于UV檢測困難的物質的分析，響應值與濃度通常不呈線性關系。

　　三、吸附色譜法

　　1.原理：被分離組分與流動相對吸附劑吸附能力的差異

　　2.常用固定相和流動相

　　固定相：硅膠、氧化鋁、高分子多孔微

　　流動相：烷烴加極性調節(jié)劑;極性越強，洗脫能力越強

　　四、分配色譜法

　　1.原理：被分離組分溶入互不相溶的固定相與流動相，達到平衡后濃度之比(分配系數)的差異

　　正相分配色譜：流動相極性小于固定相極性。極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。用于分離極性及中等極性物質

　　反相分配色譜：流動相極性大于固定相極性。極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。應用廣泛，用于分離非極性至中等極性物質

　　離子對反相色譜：在流動相中加入有機離子對試劑，用于有機酸、堿、鹽的分離

　　離子抑制色譜：調整流動相pH，抑制組分的解離

　　2.常用固定相和流動相

　　(1)固定相：化學鍵合相

　　非極性：十八烷基硅烷鍵合硅膠

　　極性：氨基和氰基硅烷鍵合相

　　(2)流動相

　　正相色譜：烷烴加極性調節(jié)劑

　　反相色譜：甲醇-水、乙腈-水

　　五、色譜系統(tǒng)適用性試驗

　　固定相種類、流動相組成、檢測器類型不得改變，其余可適當改變以達到色譜系統(tǒng)適用性試驗要求

　　1.理論塔板數：不得低于各品種項下規(guī)定的最小理論塔板數

　　2.分離度：除另有規(guī)定外，分離度應大于1.5

　　3.重復性：取各品種項下對照品2連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有規(guī)定外，拖尾因子應在0.95～1.05之間

　　六、應用

　　1.鑒別：利用保留值進行鑒別。

　　2.檢查

　　(1) 內標法加校正因子測定供試品中某個雜質含量

　　(2) 外標法測定供試品中某個雜質含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身對照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身對照法

　　(5) 面積歸一化法：一般不用于微量雜質檢查

　　3.含量測定：外標法，內標法

　　內標物要求：①原樣品中不含有的組分;②保留時間與待測組分相近，但能完全分離;③純度合乎要求。

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